去內(nèi)毒素質(zhì)粒大（小）量抽提試劑盒 NobleRyder D0904
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)去內(nèi)毒素質(zhì)粒大（小）量抽提試劑盒 NobleRyder D0904量大優(yōu)惠，咨詢 ：
去內(nèi)毒素質(zhì)粒大（小）量抽提試劑盒 NobleRyder D0904
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去內(nèi)毒素質(zhì)粒DAN提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA（10mg/ml） | 400ul | 2ml | -20℃ |
溶液Ⅰ | 10ml | 40ml | RT |
溶液Ⅱ | 10ml | 40ml | RT |
溶液Ⅲ | 10ml | 40ml | RT |
內(nèi)毒素清除劑 | 25ml | 100 ml | 2-8℃ |
結(jié)合液 | 30 ml | 120 ml | RT |
玻璃奶 | 1ml | 4ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡(jiǎn)介
本試劑盒在常規(guī)質(zhì)粒提取試劑盒的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來，增加內(nèi)毒素清步驟，提取的質(zhì)粒可用于一些要求更高的實(shí)驗(yàn)，如轉(zhuǎn)染。
本試劑盒（以200T為例）可以用200小次或者*次提取。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
注意事項(xiàng)
1．溶液Ⅱ低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以37度水浴幾分鐘即可恢復(fù)澄清透明。用完請(qǐng)及時(shí)蓋緊蓋子。
2．溶液Ⅰ中加入RNase 后請(qǐng)放2-8度保存，如果長(zhǎng)久不用（如一個(gè)月），可-20度凍存，或者按照比較分次加入。
3．可根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況中量或者大量提取，加入的試劑等比放大。
4．內(nèi)毒素清除劑在常溫下出現(xiàn)面混濁現(xiàn)象，為正常，在2-8℃放置一段時(shí)間混濁會(huì)消失。
5．本試劑盒在去除內(nèi)毒素的過程中會(huì)損失少量質(zhì)粒，因而相對(duì)于常規(guī)提取，本試劑盒得率偏低。
操作步驟（以小量提取為例,中提或者大提可等比例加入）
在溶液Ⅰ中加入RNaseA，混勻，2－8度保存。
1．取過液菌1-5毫升，5000g離心1分鐘收集細(xì)菌沉淀，棄上清（可重復(fù)多次收集于一管中，收集量可考慮菌液濃度與質(zhì)粒拷貝數(shù)），如為陽性細(xì)菌，可加入100mg/ml的溶菌酶懸浮菌液，37度處理30分鐘，離心，收集沉淀。
2．在收集的菌液中，加入200ul溶液I，重懸細(xì)菌沉淀。確保沉淀*散開，無可見細(xì)菌團(tuán)塊（可vortex 5-10秒或更長(zhǎng)時(shí)間）。室溫放置2-3分鐘。
3．每管加入200ul溶液Ⅱ（如有沉淀，可37度水浴），輕輕顛倒離心管4-6次，使細(xì)菌*裂解，溶液透明。放置2-3分鐘，不過超過5分鐘。但也不要混勻后立刻加入溶液Ⅲ。
4．放置2-3分鐘后，每管加入200ul溶液III，隨即顛倒離心管4-6次混勻，可見白色絮狀物產(chǎn)生。
5．zui高速（13,000rpm左右）室溫離心5分鐘。
6．將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，如有沉淀，可再次離心。
7．加入上清1/5體積冰預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑，振蕩混勻，溶液變渾濁，冰浴2min至溶液變清亮。
8．37℃水浴2min，不時(shí)振蕩，溶液又變渾濁。12000rpm室溫離心2min，溶液應(yīng)分為兩相，上層水相含質(zhì)粒DNA，下層油狀相含內(nèi)毒素。
9．將含質(zhì)粒DNA的上層水相轉(zhuǎn)移至新管，棄下層油狀相，注意不要吸入油狀相。重復(fù)抽提三次，即重復(fù)步驟7-9三次。
10．在得到的上清中加入等體積的結(jié)合液，再加入等體積的無水乙醇，混勻（上清：結(jié)合液：無水乙醇＝1：1：1）
11．玻璃奶搖勻。取20ul混勻的玻璃奶加入上面的混合液中，混勻。室溫放置5分鐘，期間顛倒2次。
12．10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，倒掉上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清，70%乙醇重復(fù)洗一次，再用無水乙醇洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清。
13．室溫放置10分鐘（如果為大提，請(qǐng)延長(zhǎng)放置時(shí)間到30分鐘，此步為去除殘余酒精，以免影響下游實(shí)驗(yàn)），加入30－50ulTE緩沖液混勻溶解，55℃水浴5分鐘。離心，取上清轉(zhuǎn)移到一新的離心管中。此為所提質(zhì)粒。
14．電泳或者其他方法檢測(cè)，進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。
