高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒
適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞的總 RNA，采用 gDNA 過(guò)濾器，高效濾除gDNA，不需要繁瑣的DNase I消化過(guò)程，提取的RNA，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE、芯片等。高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒
高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總 RNA 提取試劑盒
FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit
高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒
目錄號(hào)：91451
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91451-50（50 次） |
裂解液 ACL Plus | 30 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量無(wú)水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
DNA 清除/RNA 吸附通用柱 | 100 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無(wú)水乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞的總 RNA，采用 gDNA 過(guò)濾器，高效濾除gDNA，不需要繁瑣的DNase I消化過(guò)程，提取的RNA，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE、芯片等。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 無(wú)毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！
2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過(guò)程僅需 10 min！
重要提示：
① 第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 RW 中加入無(wú)水乙醇，詳見(jiàn)瓶身標(biāo)簽。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。
③ 肝臟、脾臟、腎臟、胰腺、心臟的樣本投入量不要超過(guò) 10 mg。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
操作步驟：
1. 動(dòng)物組織：
a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~25 mg，加入 500μl 裂解液 ACL Plus，電動(dòng)勻漿，直到無(wú)明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細(xì)粉，取 10~25 mg 組織細(xì)粉加入500μl裂解液 ACL Plus，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
c． 將勻漿后裂解物 13，000 rpm 離心 3 min。
d．下接步驟 3。
2. 細(xì)胞
a．懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加入500 μl裂解液 ACL Plus（<7x106 細(xì)胞），吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
b．貼壁細(xì)胞：吸棄細(xì)胞培養(yǎng)基，可以直接在培養(yǎng)皿中加裂解液ACL Plus進(jìn)行消化、裂解；或先用胰mei消化后離心收集細(xì)胞，再加入裂解液，每<7x106細(xì)胞加入500μl裂解液ACL Plus，吹打混勻，渦旋振蕩至無(wú)明顯細(xì)胞團(tuán)，使其充分裂解。
貼壁細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量表：
培養(yǎng)器皿 24 孔培養(yǎng)板 6 孔培養(yǎng)板 | 面積（cm2） 2 9.6 | 培養(yǎng)液量（ml）1.0 2.5 | 細(xì)胞數(shù)量 5×105 2.5×106 |
3.5cm 培養(yǎng)皿 | 8 | 3.0 | 2×106 |
6cm 培養(yǎng)皿 25cm 培養(yǎng)瓶 100cm 玻璃培養(yǎng)瓶 | 21 25 33 | 5.0 5.0 10 | 5.2×106 5×106 7 x 106 |
3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中（以下簡(jiǎn)稱(chēng)通用柱），13,000 rpm 離心 1 min，丟棄通用柱的內(nèi)管，保留濾液（RNA 在濾液中）。
4. 向?yàn)V液中加入0.5倍體積（通常為 250 μl）的無(wú)水乙醇，吹打混勻。
5. 將濾液混合物全部加入一個(gè)通用柱中，13,000 rpm 離心1 min，倒棄
濾液。此時(shí)，RNA被吸附在膜上。
6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置1min,13,000rpm 離心30sec，倒棄濾液。
7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
8. 重復(fù)步驟 7。
9. 把通用柱放回收集管中，13,000rpm離心2min，che底除去膜上殘留的乙醇。
10. 取出通用柱，放入新的RNase-free 1.5ml離心管中，向吸附膜的中央懸空滴加30-50μl RNase-Free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量），室溫放置1min，13,000rpm離心1min。
11. 得到的RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。
附錄：
一、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在2.0ml液氮研磨管中加入4mm兩粒，加500μl裂解液ACL plus，放進(jìn)20mg左右的樣本，設(shè)置65個(gè)頻率，震蕩2min。
b. 將裂解物13,000 rpm 離心3min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:
a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。
b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm鋼珠3粒，放進(jìn)20-30mg樣本，投入液氮中預(yù)冷。
c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置55個(gè)頻率，震蕩30~60sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）
d. 研磨完成后，馬上加500μl裂解液ACL Plus，劇烈渦旋振蕩,充分混勻。
e. 將裂解物13,000rpm離心3min，沉淀不能裂解的碎片。
相關(guān)產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
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