Script III RT MasterMix 反轉錄試劑
Script III RT MasterMix為一管式逆轉錄預混液，含有逆轉錄所需的所有試劑：Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer。Script III RT MasterMix 反轉錄試劑
Script III RT MasterMix
( Perfect for qPCR )
Script III RT MasterMix 反轉錄試劑
目錄號:71518
產品內容
Components | 71518-50 50 rxns (20 μl/rxn) | 71518-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x RT MasterMix | 200 μl | 400 μl |
RNase free H2O | 1.5 ml | 1.5 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 12 個月。
產品簡介
Script III RT MasterMix為一管式逆轉錄預混液，含有逆轉錄所需的所有試劑：Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer。
只需加入RNA模板和RNase-Free H2O，15分鐘即可完成逆轉錄反應。 操作方便快捷，逆轉錄產物兼容染料法和探針法qPCR，用于檢測高拷貝或者低拷貝基因。
注意事項
1． 避免RNase污染。
2． 為保證反轉錄成功，建議使用高質量的RNA樣品。
3． 5x RT MasterMix含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導致損失，使用前請點甩離心后取用。5x RT MasterMix包含的酶過量，即使每次分別按照3.8μl使用，也不影響使用效果。
4． 20 μl逆轉錄反應體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否則，RNA量過高，可能會超出后續qPCR的線性范圍。
5． 本產品適用于包含Ploy (A)結構的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結構的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。
6． 如果模板具有復雜二級結構或高GC區域，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻，50°C孵育15 min進行逆轉錄。
第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應體系為例)
重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心后置冰上備用。
1． 反應體系的配制
于冰上，在PCR管中，加入以下組分：
Components | Volume |
Total RNA / mRNA | 50ng ~ 1μg / 5ng ~ 100ng |
5x RT MasterMix | 4 μl |
RNase-free H2O | To 20 μl |
2． 輕柔吸打混勻，42℃孵育15 min，進行逆轉錄反應。
3． 85°C加熱5 sec，終止反應。
逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，或保存于-20°C，并在半年內使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。
qPCR
建議取1~2μl cDNA產物原液作為20μl qPCR反應體系的模板。
如果基因表達量比較高，請根據實際情況適當稀釋cDNA模板后使用。
相關產品：
71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)
71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
91011 RNAzol Reagent（Trizol）
91013 通用型總RNA快速提取試劑盒（動物、植物、細菌、真菌、酵母）
91218 動物組織/細胞/昆蟲總RNA提取試劑盒 (同RNeasy Plus Mini Kit)
91318 多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（RNeasy Plant Mini Kit的升級版)
91451 高效動物組織/細胞總RNA提取試劑盒 (動物組織、細胞)
91452 高效植物總RNA提取試劑盒（根、莖、葉、花）
Script III RT MasterMix 反轉錄試劑
